QUANSYSBIO 355149HU說明書

引言

Q-Plex Human Micronutrient v2 (7-Plex)

Q-Plex™ 人體微量營養(yǎng)素（7-復(fù)合物）臨界反饋

微量營養(yǎng)素缺乏（MND）會(huì)對(duì)個(gè)人及其后代產(chǎn)生系統(tǒng)性和持久的影響（1）。MND影響全球人口，但對(duì)中低收入國家（LMIC）育齡兒童和婦女的影響不成比例。如果不進(jìn)行治療，MND會(huì)顯著降低生活質(zhì)量并造成致命后果。需要制定公共健康監(jiān)測計(jì)劃，以確定面臨風(fēng)險(xiǎn)的人群，并確定要采取的適當(dāng)干預(yù)措施。然而，已經(jīng)表明，此類項(xiàng)目的可持續(xù)性取決于成本、能力發(fā)展和機(jī)構(gòu)基礎(chǔ)的位置（2）。

一些組織試圖提供綜合平臺(tái)，以滿足公共健康監(jiān)測項(xiàng)目的需求。通常，只有在地區(qū)或國家以外的測試中心才能使用具有良好特征的方法。這里需要注意的一個(gè)重要群體是VitMin實(shí)驗(yàn)室（德國Willst?tt），該實(shí)驗(yàn)室通常被認(rèn)為是通過傳統(tǒng)的夾心ELISA方法測量微量營養(yǎng)素的金標(biāo)準(zhǔn)（3）。然而，這種偏好造成了對(duì)服務(wù)的高需求，并在不同情況下對(duì)研究人員造成了與出口相關(guān)的障礙（4）。因此，需要一種價(jià)格合理、準(zhǔn)確且易于實(shí)施和使用的分析方法，以滿足LMICs公共健康監(jiān)測項(xiàng)目的需要。

多重微量營養(yǎng)素評(píng)估工具（MMAT）最初于2014年推出，是PATH（美國華盛頓州西雅圖）和Quansys Biosciences（美國猶他州洛根）合作開發(fā)的一種多重ELISA。MMAT在正式發(fā)布后更名為Q-Plex人體微量營養(yǎng)素（5-Plex）。該分析同時(shí)評(píng)估了5種分析物的水平，包括鐵蛋白、C反應(yīng)蛋白（CRP）、α-1-酸性糖蛋白（AGP）、可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體（sTfR）和視黃醇結(jié)合蛋白4（RBP4）（5）。與傳統(tǒng)ELISA相比，多重ELISA允許從小血樣中生成和收集更多數(shù)據(jù)。此外，與其他多重ELISA平臺(tái)不同，如Luminex和MagPix平臺(tái)依賴于可能需要專門設(shè)施、培訓(xùn)和服務(wù)的流體系統(tǒng)，Q-Plex試劑盒是根據(jù)傳統(tǒng)ELISA協(xié)議設(shè)計(jì)和遵循的，只需要相對(duì)較少的培訓(xùn)和專門設(shè)備。2017年，分析物小組擴(kuò)大到包括甲狀腺球蛋白（Tg）和組氨酸豐富蛋白II（HRP2），并更名為Q-Plex人類微量營養(yǎng)素（7-Plex）。這拓寬了分析的能力，使其能夠指示碘的狀態(tài)以及患者目前或最近是否感染了惡性瘧原蟲瘧疾（6,7）。此外，確定使用干血點(diǎn)（DBS）作為樣本類型適用于除鐵蛋白外的所有分析物，鐵蛋白在DBS中反映了血清鐵蛋白與溶解紅細(xì)胞的細(xì)胞內(nèi)鐵蛋白的混合物，混淆了測試結(jié)果（8）。

Quansys Biosciences和PATH以外的實(shí)驗(yàn)室對(duì)Q-Plex人體微量營養(yǎng)素（7-Plex）分析進(jìn)行了廣泛測試，以在現(xiàn)場廣泛部署之前驗(yàn)證其性能。外部測試表明許多分析物具有良好的相關(guān)性，但確定了與更成熟的方法有關(guān)的數(shù)據(jù)相關(guān)性問題。一項(xiàng)研究表明，從Q-Plex人體微量營養(yǎng)素（7-Plex）和維生素產(chǎn)生的數(shù)據(jù)之間存在差異

尤其是sTfR、AGP、RBP4之間的差異，以及鐵蛋白分析的敏感性（4）。CDC完成的第二項(xiàng)研究將Quansys ferritin、sTfR、CRP和AGP與羅氏臨床分析儀的ferritin、sTfR、CRP和AGP進(jìn)行了比較，并使用視黃醇HPLC參考標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其中一些結(jié)果進(jìn)行了支持，強(qiáng)調(diào)了sTfR和RBP4的可變性（9）。

CDC正在進(jìn)行外部質(zhì)量保證工作，以提高錳分析的標(biāo)準(zhǔn)化，為驗(yàn)證外部發(fā)現(xiàn)提供了一個(gè)支持平臺(tái)。從CDC方法性能認(rèn)證計(jì)劃中獲得40份樣本，由羅氏臨床分析儀對(duì)CRP、sTfR、鐵蛋白、AGP和視黃醇HPLC進(jìn)行10次單獨(dú)運(yùn)行，一式兩份。在Q-Plex人體微量營養(yǎng)素（7-Plex）上生成的這些樣品的數(shù)據(jù)與CDC的鐵蛋白和CRP參考值（圖1-2）很好地一致，但分析結(jié)果顯示一致性較差

對(duì)于AGP、sTfR和RBP4，與先前研究的結(jié)果相關(guān)（圖3-5）。此處未顯示甲狀腺球蛋白的數(shù)據(jù)，因?yàn)镃DC參考樣品尚未對(duì)該分析物進(jìn)行表征。

綜上所述，這些數(shù)據(jù)和第三方評(píng)估提供的反饋明確強(qiáng)調(diào)了需要改進(jìn)的領(lǐng)域，以便MMAT分析成為現(xiàn)有方法的可行替代方法。簡而言之，要點(diǎn)如下：

•鐵蛋白分析的敏感性

•RBP4分析的精度

•sTfR和AGP數(shù)據(jù)與既定方法的相關(guān)性

Q-叢™ 人體微量營養(yǎng)素（7倍）數(shù)據(jù)

為了解決需要改進(jìn)的領(lǐng)域，Quansys改進(jìn)了工具，以生成Q-Plex人體微量營養(yǎng)素v2（7-Plex）。具體而言，新的捕獲抗體提高了鐵蛋白分析的靈敏度，同時(shí)仍保持與參考樣品的相關(guān)性（圖1）。這改變了分析范圍，以確保樣品分布更一致地落在可量化范圍的中間，從而對(duì)鐵蛋白含量較低的樣品進(jìn)行更精確的測量。（圖6A）。

觀察到的RBP4缺乏精確度被確定為與RBP4樣本值低于或高于分析定量上限有關(guān)。為了應(yīng)對(duì)這一挑戰(zhàn)，對(duì)分析進(jìn)行了重新校準(zhǔn)，以確保所有內(nèi)源性樣本，而不僅僅是來自缺乏維生sA的個(gè)體的樣本，都落入標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性部分，其中定量更精確（圖6B）。這是由于鐵蛋白分析的靈敏度提高，使樣品的工作稀釋度從1:10增加到1:40。此外，使用CDC的血清微量營養(yǎng)素性能驗(yàn)證項(xiàng)目樣本進(jìn)行的測試數(shù)據(jù)顯示，RBP4和視黃醇水平之間存在很強(qiáng)的相關(guān)性（R2=0.75）（圖5）。

在RBP4和鐵蛋白的1:40樣品稀釋法下，AGP、CRP、Tg、HRP2和sTfR均再次優(yōu)化。

CRP和Tg的性能特征沒有隨新的樣品稀釋因子發(fā)生顯著變化（圖2），然而，AGP結(jié)果表明，優(yōu)化改進(jìn)了與參考值的相關(guān)性，同時(shí)也使數(shù)據(jù)點(diǎn)偏離了量化限制（圖6C-D）。為了改進(jìn)sTfR分析，確定了新的捕獲和檢測抗體集，并用于改善與CDC參考值的相關(guān)性（圖4）。

改進(jìn)微量營養(yǎng)素測定的最后一步是消除技術(shù)障礙，在使用相同的試劑盒和材料處理樣品時(shí)，這可能會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室之間的差異。在整個(gè)方案的培養(yǎng)步驟中，無需搖床即可優(yōu)化分析。這不僅減輕了設(shè)備要求的負(fù)擔(dān)，而且消除了因以可變速度運(yùn)行的平板振動(dòng)篩之間的差異而產(chǎn)生的任何變化。此外，Quansys還提供了對(duì)照樣品，以確保分析性能。

總之，新優(yōu)化的Q-Plex人體微量營養(yǎng)素v2（7-Plex）分析通過以下方式處理反饋：

•提高鐵蛋白分析的靈敏度

•提高RBP4分析的精確度

•改進(jìn)sTfR和AGP數(shù)據(jù)與既定方法的相關(guān)性

•不再需要平板振動(dòng)篩