dld-diagnostika EA611/96說明書

Calretinin ELISA

酶免疫法定量測定血漿和血清中鈣視網(wǎng)膜蛋白

1.試驗的介紹和原理

一段時間以來，世界上超過55個國家禁止生產(chǎn)和使用石棉。然而，石棉相關(guān)癌癥——主要是惡性肺癌和間皮瘤——的數(shù)量仍然很高。

由于這種疾病的潛伏期很長，而且一些國家正在生產(chǎn)和應(yīng)用石棉，預(yù)計不會有實質(zhì)性的改善。早期發(fā)現(xiàn)腫瘤——最好是在沒有臨床癥狀的階段——可能會提高治愈治療的機會。DLD Diagnostika GmbH與德國社會意外保險預(yù)防和職業(yè)醫(yī)學(xué)研究所（波鴻魯爾大學(xué)（IPA）的科學(xué)家合作，開發(fā)了一種有前途的方法，該方法基于鈣視網(wǎng)膜蛋白作為血漿和血清樣本中早期檢測（尤其是間皮瘤）的生物標記物。目前，鈣視網(wǎng)膜蛋白是檢測間皮瘤的最佳標記物之一。

calretinin ELISA是一種利用純化兔多克隆抗體的夾心酶免疫分析法。在培養(yǎng)過程中，稀釋患者樣本中的鈣視網(wǎng)膜蛋白與固定在微量滴定板孔表面的鈣視網(wǎng)膜蛋白抗體（捕獲抗體）結(jié)合。清洗步驟后，添加生物素化鈣視網(wǎng)膜蛋白抗體（檢測抗體），該抗體與患者樣本中捕獲的鈣視網(wǎng)膜蛋白結(jié)合。在第二個洗滌步驟后，加入共軛鏈霉親和素過氧化物酶，與生物素化檢測抗體特異性結(jié)合。第三步洗滌后，酶的結(jié)合量——相當于鈣視網(wǎng)膜蛋白的量——通過底物四甲基本甲啶（TMB）的周轉(zhuǎn)進行量化。

在酶反應(yīng)過程中，會產(chǎn)生藍色染料。加入硫酸會停止反應(yīng)，使溶液變黃。使用微量滴定板讀取器在450 nm（參考波長在570 nm和650 nm之間）下測量樣品的消光度，并使用分析的標準品和對照品計算鈣視網(wǎng)膜蛋白的濃度。

2.注意事項

? 僅供體外使用。

? 應(yīng)使用一次性手套和安全眼鏡。

? 本試劑盒中使用的所有人類來源試劑均經(jīng)過HIV I/II抗體、HCV和HBsAg檢測，結(jié)果為陰性。然而，由于沒有任何測試方法可以*保證不存在傳染源，因此這些試劑應(yīng)作為潛在的生物危險物質(zhì)處理。

? 用于制備試劑盒的動物源性材料來自經(jīng)認證的健康動物，但這些材料應(yīng)被視為具有潛在傳染性。

? 該試劑盒的某些組件含有危險試劑。這些部件標有適當?shù)奈ｋU標簽。

3.儲存和穩(wěn)定性

到達后，將試劑盒儲存在2-8°C的溫度下。一旦打開試劑盒，試劑盒將保持穩(wěn)定，直至到期。有關(guān)制備試劑的穩(wěn)定性，請參閱試劑的制備。不要使用超過套件標簽上顯示的有效期的組件。不要在單個分析中混合不同批次的任何試劑盒成分。

需要但未提供的其他材料和設(shè)備：

? 移液管15、50、60和100µl

? 軌道振動篩

? 多通道移液管或微孔板清洗裝置

? Eppendorf Multipette（或類似設(shè)備）

? 微孔板光度計（450 nm）

? 離心機（2500克）

? 蒸餾水

5.樣本收集和儲存

可使用EDTA血漿和血清進行檢測。

EDTA血漿和血清

應(yīng)使用EDTA血漿和血清。溶血和血脂樣本

不應(yīng)使用。

樣品可在2-8°C下儲存12小時。對于更長的儲存時間（最多24個月），樣品必須在-20°C下冷凍。應(yīng)避免重復(fù)冷凍和解凍樣品。