cytoskeleton BK165-S說明書

發(fā)布時間：2019/2/18

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cytoskeleton BK165-S說明書

新的Signal-Seeker™SUMOylation 1檢測試劑盒（10種檢測）

量

10種檢測方法（Cat。＃BK165-S）

Signal-Seeker™系列產(chǎn)品的開發(fā)旨在簡化專家和非專業(yè)人士對關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白修飾的分析。全面的Signal-Seeker™試劑盒提供親和珠系統(tǒng)，可從任何給定的細(xì)胞或組織裂解液中分離和富集修飾的蛋白質(zhì)。然后使用針對靶蛋白的抗體通過標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)印跡程序分析富集的蛋白質(zhì)群體。

產(chǎn)品用途包括

調(diào)查瞬態(tài)監(jiān)管機(jī)制
測量多種途徑成員蛋白的信號傳導(dǎo)事件
發(fā)現(xiàn)您感興趣的蛋白質(zhì)的新修改
深入了解監(jiān)管機(jī)制
測量內(nèi)源性或瞬時表達(dá)的蛋白質(zhì)信號傳導(dǎo)事件

套件內(nèi)容

SUMOylation 1試劑盒包含以下組分：

裂解和蛋白質(zhì)定量步驟

IP和預(yù)清除步驟

洗步驟

洗脫步驟

西部一步

BlastR™裂解緩沖液

BlastR™稀釋緩沖液

BlastR™過濾器

蛋白酶抑制劑雞尾酒

去SUMO化抑制劑雞尾酒

Precision Red™蛋白質(zhì)分析試劑

SUMOylation 1 Affinity Beads

IP控制珠

BlastR™洗滌緩沖液

旋轉(zhuǎn)列

珠子洗脫緩沖液

化學(xué)發(fā)光試劑A.

化學(xué)發(fā)光試劑B.

抗SUMO1抗體

示例結(jié)果

這些套件有很多應(yīng)用，這里我們描述一個有趣的例子：

應(yīng)用1：研究重要的SUMOylation 1事件

與舊的SUMO1工具相比，使用Signal-Seeker™SUMOylation 1檢測試劑盒免疫沉淀總SUMO1譜

（A）使用BlastR裂解和過濾系統(tǒng)獲得HAP1野生型（WT）或SUMO1敲除（KO）裂解物。將1mg每種裂解物與40mg每種SUMO1親和試劑一起溫育：ASM11-珠（Cytoskeleton），21C7（Invitrogen純化的），21C7（DSHB-上清液），D11-珠（Santa Cruz）和綴合的SUMO1 IgG對照珠。（CIG03）。用蛋白G瓊脂糖珠捕獲21C7抗體以富集SUMO-1修飾的蛋白。通過SDS-PAGE分離樣品并轉(zhuǎn)移至PVDF。使用1：5000的ASM01（Cytoskeleton）抗體和5％牛奶中1：1000的小鼠Trubelot Ultra-HRP二抗，通過蛋白質(zhì)印跡分析富集的SUMO1樣品。Trueblot secondary用于小化21C7樣品的重鏈和輕鏈檢測。

（B）：使用ASM11進(jìn)行IP，如圖1A所示。SUMO1修飾的蛋白質(zhì)用ASM01 1：5000顯示，抗小鼠以1：20,000顯示，以突出在64-30kDa范圍內(nèi)SUMO化蛋白質(zhì)的分布，當(dāng)使用未綴合的抗體時，可能被重鏈和輕鏈干擾掩蓋。 IP。

與舊的SUMO1工具相比，使用Signal-Seeker™SUMOylation 1檢測試劑盒免疫沉淀SUMO1修飾的靶蛋白

使用BlastR裂解和過濾系統(tǒng)獲得HAP1野生型（WT）或SUMO1敲除（KO）裂解物。1毫克每裂解物與40孵育米 ASM11珠（細(xì)胞骨架），21C7（DSHB上清液），和共軛SUMO1 IgG對照珠（CIG03）：g各自SUMO1親和試劑的。用蛋白G瓊脂糖珠捕獲21C7抗體以富集SUMO-1修飾的蛋白。通過SDS-PAGE分離樣品并轉(zhuǎn)移至PVDF。靶蛋白：通過蛋白質(zhì)印跡分析（A）TFII-I，RanGAP1和（B）schmd1的SUMO1修飾形式?？雇?HRP標(biāo)記的第二抗體以1：10,000使用。所有三種一抗均為兔多克隆抗體，不應(yīng)結(jié)合來自IP抗體的重鏈和輕鏈片段。

在這一研究領(lǐng)域可以嘗試的其他實(shí)驗(yàn)包括：

•參與調(diào)節(jié)靶蛋白的SUMOylating和去SUMOylating酶的藥理學(xué)研究。

•在各種不同的生長因子或藥物治療下研究SUMO化。

•檢查SUMOylated靶蛋白與其下游效應(yīng)子的相互作用。

•檢查SUMOylation 1和其他PTM之間對目標(biāo)蛋白的串?dāng)_。

Signal-Seeker™SUMOylation 1檢測試劑盒（10次檢測）	BK165-S
Signal-Seeker™SUMOylation 1檢測試劑盒（30種檢測）	BK165
Signal-Seeker™乙酰賴氨酸檢測試劑盒（10次檢測）	BK163-S
Signal-Seeker™乙酰賴氨酸檢測試劑盒（30種檢測）	BK163
Signal-Seeker™磷酸酪氨酸檢測試劑盒（10種檢測）	BK160-S
Signal-Seeker™磷酸酪氨酸檢測試劑盒（30種檢測）	BK160
Signal-Seeker™SUMOylation 2/3檢測試劑盒（10種檢測）	BK162-S
Signal-Seeker™SUMOylation 2/3檢測試劑盒（30種檢測）	BK162
Signal-Seeker™泛素化檢測試劑盒（10種檢測）	BK161-S
Signal-Seeker™泛素化檢測試劑盒（30種檢測）	BK161

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