重組豬源RNase抑制劑說明書
上海起發(fā)生物科技有限公司（Shanghai BioHub Biotechnology Co., Ltd.）屬于上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司（2009年成立）旗下的子公司，成立的初衷是建立上海起發(fā)生物自有品牌，打造優(yōu)質(zhì)的生物試劑民族自有品牌。降低成本的同時(shí)，把好生物產(chǎn)業(yè)鏈中的國(guó)產(chǎn)生物試劑品質(zhì)關(guān)。未來讓每一個(gè)和我們一樣擁有民族情懷的企業(yè)，共同創(chuàng)世界優(yōu)秀的中國(guó)生物制造企業(yè)，圓夢(mèng)中國(guó)。
產(chǎn)品詳情
貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格 |
78BAB10003-100uL | 100uL(4KU) | ￥200.00 |
78BAB10003-1ml | 1ml (40KU) | ￥1600.00 |
78BAB10003-50ml | 50ml (2MU) | ￥50000.00 |
產(chǎn)品描述
本產(chǎn)品是以大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá)，并通過親和層析純化的重組豬源RNase抑制劑，該蛋白特征與豬肝和人胎盤來源此類酶相似，可替代天然提取 RNase Inhibitor的應(yīng)用。本產(chǎn)品與RNase A形成1： 1復(fù)合體，抑制RNase活性。該反應(yīng)是可逆的，通過尿素及巰基類試劑能夠解離復(fù)合體，使RNase復(fù)性而抑制劑不可逆失活。本產(chǎn)品與其它競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑（核酸類，無機(jī)磷酸類）不同，可以很容易地通過苯酚處理將其從反應(yīng)體系中除去，但不能抑制逆轉(zhuǎn)錄酶的RNase H的活性。使用時(shí)可直接加入含有RNA的反應(yīng)液中用于cDNA第一鏈合成、體外轉(zhuǎn)錄和體外翻譯等實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品特點(diǎn)
· cDNA合成
· 體外轉(zhuǎn)錄
· 體外翻譯
· 1-Step RT-qPCR
產(chǎn)品組分
緩沖液成分：20 mM HEPES-KOH(pH 7.6)，50mM KCl，8mM DTT，50% (v/v) glycerol。
使用方法
使用方法
溫馨提示：需要用無RNA酶的PCR管中配制RNA/引物預(yù)混液
1 cDNA合成
（1）在無RNA酶的PCR管中配制RNA/引物預(yù)混液
組分 | 反應(yīng)體積（10ul） |
Oligo(dT)20 （或Random primer） （或基因特異引物） | 25pmoles (25pmoles) (5pmoles) |
10mM dNTPs | 2µL |
模板RNA | 2pg-5µg |
DNase/Rnase Free Water | 10ul |
（2）65℃加熱5min，立即置于冰上
組分 | 反應(yīng)體積（10ul） |
RNA引物預(yù)混液 | 10ul |
5x RT Buffer | 4µL |
BIOHUB Reverse Transcritase | 1ul |
RNase inhibitor(40U/µL) | 1ul |
100mM DTT | 2ul |
DNase/Rnase Free Water | 補(bǔ)足20ul |
（3）輕輕混勻，按如下反應(yīng)條件設(shè)置
逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)條件 | ||
1 | 42℃ | 20-60min |
2 | 99℃ | 5min |
備注：逆轉(zhuǎn)錄溫度可在42-60℃之間調(diào)整，反應(yīng)時(shí)間建議在20-60min內(nèi)調(diào)整
（4）得到的cDNA溶液可以直接用于第二鏈cDNA合成及后續(xù)PCR反應(yīng)。
優(yōu)化參考方法
優(yōu)化參數(shù) | 參考范圍 |
逆轉(zhuǎn)錄 | 50-60℃ 5-15min |
預(yù)變性溫度時(shí)間 | 95-98℃ 10sec-5min |
變性溫度 | 95-98℃ 3sec-10sec |
延伸/退火溫度 | 60-65℃ 5sec-30sec |
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品在PH7?8時(shí)表現(xiàn)最佳抑制RNase活性。
2. 本產(chǎn)品發(fā)揮活性作用至少添加1 mM的DTT。
3. 本產(chǎn)品不抑制RNase H活性及逆轉(zhuǎn)錄酶活性。
運(yùn)輸及保存方法
-20℃可保存12個(gè)月。
