lumiprobe ProteOrange 蛋白質(zhì)定量試劑盒說明書

ProteOrange 蛋白質(zhì)定量試劑盒

該蛋白質(zhì)定量試劑盒的核心是一種非常靈敏的 ProteOrange 熒光染料。該染料適用于熒光分光光度計和酶標(biāo)儀。該試劑盒針對蛋白質(zhì)定量進(jìn)行了優(yōu)化，最終溶液中蛋白質(zhì)的檢測水平低至 10 ng/mL。

ProteOrange 蛋白質(zhì)定量試劑盒  

帶有熒光染料的 ProteOrange 試劑盒允許以比分光光度法和其他用于蛋白質(zhì)定量的常規(guī)方法（Lowry，Bradford，BCA）更高的靈敏度進(jìn)行蛋白質(zhì)定量。

ProteOrange 試劑是試劑盒的關(guān)鍵成分，其游離形式幾乎沒有熒光。在溶液中，它與蛋白質(zhì)分子形成復(fù)合物，并在與蛋白質(zhì)結(jié)合時表現(xiàn)出增加的熒光。ProteOrange 在與蛋白質(zhì)的復(fù)合物中的激發(fā)最大值在 ~485 nm，發(fā)射最大值在 ~590 nm。該試劑盒可與任何具有合適激發(fā)源和檢測通道的熒光計一起使用。一般來說，所測蛋白質(zhì)濃度的工作范圍受設(shè)備靈敏度的限制。對于比色皿熒光計，推薦的可測量濃度范圍為 10 ng/mL 至 10 µg/mL，對于平板熒光計，推薦濃度范圍為 100 ng/mL 至 10 µg/mL。

該試劑盒包含 ProteOrange 熒光染料、用于制備染料工作溶液的緩沖液和蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)品（BSA，2 mg/mL）。為了量化測試蛋白質(zhì)，制備染料工作溶液并用它來稀釋測試樣品和已知蛋白質(zhì)濃度的樣品以生成校準(zhǔn)曲線。使用來自試劑盒的牛血清白蛋白或（如果有）與測試樣品中相同的實驗蛋白質(zhì)制備蛋白質(zhì)濃度標(biāo)準(zhǔn)。在 95°C 下孵育準(zhǔn)備好的樣品 10 分鐘以使蛋白質(zhì)變性，讓它們冷卻至室溫并測量熒光強(qiáng)度。

根據(jù)樣品體積，測量次數(shù)從 200（標(biāo)準(zhǔn)熒光比色皿的樣品體積 2.5 mL 和分析體積 2 mL）到 2000（96 孔板的樣品體積 250 µL 和分析體積 200 µL）不等。