intronbio 25021說明書
i-Taq™ DNA Polymerase
i-Taq™DNA聚合酶
Cat.No | Capacity |
25021 | 250 unit |
25022 | 500 unit |
產品信息
描述
高純度i-Taq™PCR核心試劑盒，無論模板類型和反應條件如何，均可顯示穩定，的DNA擴增
i-Taq™DNA聚合酶是一種94kDa的熱穩定DNA聚合酶，通過克隆Thermus aquaticus（菌株YT1）的聚合酶基因在大腸桿菌中表達。它去除了大腸桿菌來源的蛋白質和DNA，它可以作為PCR中的污染物，是穩定有效的DNA擴增產物。基因組DNA，cDNA等可以擴增至5Kb。PCR（聚合酶鏈反應）是通過特異性重復特定DNA位點的合成來擴增試管中所需DNA分子的方法。結果，可以使用非常少量的DNA合成大量的DNA。當然，它廣泛用于基礎生物學，醫學和生物學領域。我們現在正在簡單快捷地擴大其在法醫，食品，環境衛生和動植物檢驗領域的使用范圍。58體外-10 倍。擴增的DNA可用于如下的各種實驗。根據實驗結果，可以應用各種醫學研究。在開發該方法的早期，使用大腸桿菌DNA聚合物進行PCR，因此必須在每次變性時補充變性大腸桿菌的DNA聚合酶。然而，通過在PCR中使用從Thermus aquaticus分離的熱穩定DNA聚合酶，我們不必每一步都做補充酶的麻煩任務。結果，PCR成為分子生物學*的方法。PCR具有一系列三個步驟并重復30至40次。
PCR的步是DNA的變性，通過加熱分離兩條DNA鏈。每個分離的DNA用作模板，變性溫度取決于DNA中G + C的量和長度。PCR的第二步是退火。在此階段，引物與模板DNA結合，退火溫度是決定反應準確性的重要因素。如果溫度太高，引物將與模板DNA結合得太弱。如果溫度太低，可以擴增不需要的DNA，因為引物非特異性結合。PCR的第三步是延伸步驟。在這個階段，耐熱DNA聚合酶將從模板DNA產生新的DNA。i-Taq™DNA聚合酶除高純度酶外，通過優化緩沖液組合物以顯示良聚合酶活性，無論模板類型或模板的一半，都可以獲得高度可重復的結果。由于用該酶擴增的大多數產物在3端具有堿基A，因此可以將PCR產物原樣克隆到T載體中。它也可以通過用DNA聚合酶如Klenow DNA聚合酶或T4 DNA聚合酶填充它而將其磷酸化成平末端而克隆到平端載體中。
應用
套件內容
| 內容 | 250個單位 | 500個單位 |
|---|---|---|
| i-Taq™DNA聚合酶（5U / ml） | 250單位×1管 | 500單位×1管 |
| 10×PCR緩沖液（含20 mM MgCl2） | 1毫升×1管 | 1毫升×1管 |
| 10×MgCl 2游離PCR緩沖液 | 1毫升×1管 | 1毫升×1管 |
| 10 mM dNTPs（2.5 mM /每個） | 500μl×1管 | 1毫升×1管 |
| 25mM MgCl 22 | 1毫升×1管 | 1毫升×1管 |
| 手冊 | 1 ea | 1 ea |
技術數據
靈敏度比較數據（與其他公司比較）
i-Taq TM DNA聚合酶與公司A，B相同功能的DNA聚合酶的靈敏度比較。在該實驗中，通過濃縮稀釋牛gDNA并用CSF引物擴增。
泳道M，100bp DNA標記; 泳道1,1ng gDNA; 泳道2,100pg gDNA; 泳道3,10pg gDNA; 泳道4,1 gg gDNA; 泳道5,100fg gDNA; 泳道N，陰性對照
批次穩定性數據
確認了每批i-Taq TM DNA聚合酶的靈敏度活性。從連續稀釋的SNU-1 cDNA和λDNA中擴增GAPDH（575bp）和1Kb片段以確認靈敏度。使用1單位的i-Taq TM DNA聚合酶擴增總共20ml反應混合物，并通過瓊脂糖凝膠電泳分析5ml。
泳道M，100bp DNA標記; 1 Kb DNA標記; 泳道N，陰性對照
